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解一下RPMI-1640培養(yǎng)基的配置方法吧

更新時(shí)間:2022-12-06  |  點(diǎn)擊率:1016
  RPMI全稱為RoswellParkMemorialInstitute,指的是洛斯維·帕克紀(jì)念研究所。RPMI是這個(gè)研究所研發(fā)的一類細(xì)胞培養(yǎng)基,1640是培養(yǎng)基代號(hào)。
 
  RPMI-1640培養(yǎng)基是Moore等人于1967年在RoswellParkMemorialInstitute研制,最初針對(duì)淋巴細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)計(jì),含BSS+21種氨基酸+維生素11種等。現(xiàn)在已經(jīng)廣泛應(yīng)用于各種正常細(xì)胞和癌細(xì)胞的培養(yǎng),尤其是懸浮細(xì)胞的培養(yǎng),是使用最為廣泛的培養(yǎng)基之一。
 
  (也可以參考使用用來(lái)養(yǎng)其他細(xì)胞,比如我養(yǎng)的巨噬細(xì)胞就是典型的貼壁細(xì)胞,可以用1640來(lái)養(yǎng)。曾經(jīng)試過(guò)用DMEM養(yǎng)這個(gè)巨噬,結(jié)果全部不貼壁,浪費(fèi)了珍貴的細(xì)胞)
 
  RPMI-1640培養(yǎng)基最初是為淋巴細(xì)胞培養(yǎng)專門設(shè)計(jì)的,其含有多類細(xì)胞培養(yǎng)所需的氨基酸、維生素、無(wú)機(jī)鹽等多種成分,但不含蛋白質(zhì)、脂類或者任何生長(zhǎng)因子,需搭配血清和無(wú)血清添加物使用。
 
  下面讓我們一起來(lái)了解一下RPMI-1640培養(yǎng)基的配置方法吧
 
  一、干粉培養(yǎng)基的過(guò)濾配制
 
  1、將1升量的干粉在950ml細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)純凈水中溶解
 
  2、加入2克碳酸氫鈉,繼續(xù)攪拌至溶解
 
  3、用1N鹽酸或1N氫氧化鈉調(diào)整到要求的pH,并將溶液體積調(diào)至1000ml
 
  4、在超凈臺(tái)內(nèi)用0.22um濾膜負(fù)壓過(guò)濾
 
  5、將培養(yǎng)基在2~8℃避光保存
 
  二、高壓滅菌型的配制
 
  1、將1升的高壓滅菌型干粉在900ml細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)純凈水中溶解
 
  2、將溶液pH調(diào)至4.0并將溶液體積調(diào)至960ml
 
  3、在121℃,15psi高壓消毒5分鐘
 
  4、將培養(yǎng)基迅速取出,避免過(guò)久加熱引起成份分解或液體蒸發(fā)減少
 
  5、待培養(yǎng)基冷卻至室溫后,無(wú)菌操作加入29.3ml的無(wú)菌7.5%碳酸氫鈉溶液,及10ml的無(wú)菌200mML-谷氨酰胺
 
  6、如有必要,用無(wú)菌的1N鹽酸或1N氫氧化鈉調(diào)整pH
 
  7、將培養(yǎng)基在2~8℃避光保存
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